誰(shuí)知道革蘭染色發(fā)明的歷史小故事?
革蘭氏染色法是細菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法,1884年由丹麥醫師、細菌學(xué)家 Christain Gram創(chuàng )立。
細菌先經(jīng)堿性染料結晶染色,而經(jīng)碘液媒染后,用酒精脫色,在一定條件下有的細菌此色不被脫去,有的可被脫去,因此可把細菌分為兩大類(lèi),前者叫做革蘭氏陽(yáng)性菌(G+),后者為革蘭氏陰性菌(G—)。為觀(guān)察方便,脫色后再用一種紅色染料如堿性蕃紅等進(jìn)行復染。陽(yáng)性菌仍帶紫色,陰性菌則被染上紅色。有芽胞的桿菌和絕大多數和球菌,以及所有的放線(xiàn)菌和真菌都呈革蘭氏正反應;弧菌,螺旋體和大多數致病性的無(wú)芽胞桿菌都呈現負反應。革蘭氏陽(yáng)性菌對青霉素敏感,革蘭氏陰性菌對鏈霉素敏感。可根據革蘭氏染色法鑒別不同菌種并對癥下藥。
革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌在化學(xué)組成和生理性質(zhì)上有很多差別,染色反應不一樣。現在一般認為革蘭氏陽(yáng)性菌體內含有特殊的核蛋白質(zhì)鎂鹽與多糖的復合物,它與碘和結晶紫的復合物結合很牢,不易脫色,陰性菌復合物結合程度底,吸附染料差,易脫色,這是染色反應的主要依據。 另外,陽(yáng)性菌菌體等電點(diǎn)較陰性菌為低,在相同PH條件下進(jìn)行染色,陽(yáng)性菌吸附堿性染料很多,因此不易脫去,陰性菌則相反。所以染色時(shí)的條件要嚴格控制。例如,在強堿的條件下進(jìn)行染色,兩類(lèi)菌吸附堿性染料都多,都可呈正反應;PH很低時(shí),則可都呈負反應。此外,兩類(lèi)菌的細胞壁等對結晶紫—碘復合物的通透性也不一致,陽(yáng)性菌透性小,故不易被脫色,陰性菌透性大,易脫色。所以脫色時(shí)間,脫色方法也應嚴格控制。
革蘭氏染色原理:
G+菌:細胞壁厚,肽聚糖網(wǎng)狀分子形成一種透性障,當乙醇脫色時(shí),肽聚糖脫水而孔障縮小,故保留結晶紫-碘復合物在細胞膜上。呈紫色。
Gˉ菌:肽聚糖層薄,交聯(lián)松散,乙醇脫色不能使其結構收縮,其脂含量高,乙醇將脂溶解,縫隙加大,結晶紫-碘復合物溶出細胞壁,沙黃復染后呈紅色。
革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個(gè)步驟,具體操作方法是:
1)涂片固定。在無(wú)菌操作條件下,用接種環(huán)挑取少量細菌于干凈的載玻片上涂布均勻,固定。
2)草酸銨結晶紫染1分鐘。
3)自來(lái)水沖洗,去掉浮色。
4) 用碘-碘化鉀溶液媒染1分鐘,傾去多余溶液。
5)用中性脫色劑如乙醇或丙酮酸脫色,革蘭氏陽(yáng)性菌不被褪色而呈紫色,革蘭氏陰性菌被褪色而呈無(wú)色。
6)用蕃紅染液復染1分鐘,革蘭氏陽(yáng)性菌仍呈紫色,革蘭氏陰性菌則呈現紅色。革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌即被區別開(kāi)。
為了研究細菌的形態(tài),微生物學(xué)家發(fā)明了對細菌的染色,有用一種染色劑的稱(chēng)單染,僅能對細菌形態(tài)觀(guān)察。用兩種以上的稱(chēng)復染,革蘭氏發(fā)明了復染色法;先后用兩種染色劑和媒染劑、脫色劑組合,由此而命名為革蘭染色。
革蘭染色不僅可以觀(guān)察細菌的形態(tài),同時(shí)將細菌分為兩大類(lèi)。一類(lèi)是染色陽(yáng)性菌是紫色,另一類(lèi)染色陰性的是紅色。
由于細菌的結構上的差異,形成了不同的染色效果。了解染色性能有助于臨床用藥和細菌的鑒定;
如青霉素對革蘭染色陽(yáng)性菌有效,當化膿性細菌感染可首選藥物。而氟哌酸對革蘭染色陰性桿菌有效,如腸道病、腹瀉為常用藥。
當從尿道培養出革蘭陰性雙球菌,可以作為淋病感染的重要指癥。如出現革蘭染色陽(yáng)性的葡萄球菌,又可作為金黃色葡萄球菌感染依據
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